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    浅谈动物体内转染试剂的主要特点及操作步骤

    2020-12-15      107
      动物体内转染试剂通过纳米技术合成,通过物理作用与核酸结合,浓缩包裹核酸,从而保护核酸免受免疫系统破坏,同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分,由于处于纳米尺度,粒径小,不易引起免疫反应,不影响动物和器官组织的功能,可以多次在同一动物注射。
      
      于动物体内转染,可直接转染RNA到动物体内进行:
      
      1、基因治疗的动物体内研究;
      
      2、RNA干扰的动物体内研究;
      
      3、蛋白功能的动物体内研究。
      
      动物体内转染试剂主要特点:
      
      1、3天可以得到结果,核酸+转染试剂,注射动物,完成转染。
      
      2、肝、肾、心、肺,血液系统,神经系统,皮肤…成功应用。
      
      3、可方便、快捷更换不同的小片断RNA进行动物试验。
      
      4、方法先进,抛弃病毒,众多实验室应用,稳定可靠。
      
      5、比使用病毒节省90%以上费用,时间缩短到3天。
      
      动物体内转染试剂操作步骤:
      
      1、传代细胞准备细胞在转染前24h传代,待细胞密度达50%~60%满底时即可进行转染。加入沉淀前3~4h,用9ml完全培养液培养细胞。
      
      2、DNA沉淀液的准备首先将质粒DNA用乙醇沉淀(10~50μg/10cm平板),空气中晾干沉淀,将DNA沉淀重悬于μL无菌水中,加50μL2.5mol/LCaCl2。
      
      3、用吸管在500μL2×HeBS中逐滴加入DNA-CaCl2溶液,同时用另一吸管吹打溶液,直至DNA-CaCl2溶液滴完,整个过程需缓慢进行,至少需持续1~2min。
      
      4、室温静置30min,出现细小颗粒沉淀。
      
      5、将沉淀逐滴均匀加入10cm平板中,轻轻晃动。
      
      6、在标准生长条件下培养细胞4~16h。除去培养液,用5ml1×HeBS洗细胞2次,加入10ml完全培养液培养细胞。收集细胞或分入培养皿中选择培养。
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